熒光顯微鏡的使用方法

熒光顯微鏡用于研究細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)的吸收、運(yùn)輸、化學(xué)物質(zhì)的分布及定位等。細(xì)胞中有些物質(zhì)，如葉綠素等，受紫外線照射后可發(fā)熒光；另有一些物質(zhì)本身雖不能發(fā)熒光，但如果用熒光染料或熒光抗體染色后，經(jīng)紫外線照射亦可發(fā)熒光，熒光顯微鏡就是對(duì)這類物質(zhì)進(jìn)行定性和定量研究的工具之一。  

它是以紫外線為光源，用以照射被檢物體，使之發(fā)出熒光，然后在顯微鏡下觀察物體的形狀及其所在位置。用于研究細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)的吸收、運(yùn)輸、化學(xué)物質(zhì)的分布及定位等。細(xì)胞中有些物質(zhì)，如葉綠素等，受紫外線照射后可發(fā)熒光;另有一些物質(zhì)本身雖不能發(fā)熒光，但如果用熒光染料或熒光抗體染色后，經(jīng)紫外線照射亦可發(fā)熒光，就是對(duì)這類物質(zhì)進(jìn)行定性和定量研究的工具之一。  

反光鏡的反光層一般是鍍鋁的，因?yàn)殇X對(duì)紫外光和可見(jiàn)光的藍(lán)紫區(qū)吸收少，反射達(dá)90%以上，而銀的反射只有70%;一般使用平面反光鏡。  

專為熒光顯微鏡設(shè)計(jì)制作的聚光器是用石英玻璃或其他透紫外光的玻璃制成，分明視野聚光器和暗視野聚光器兩種。還有相差熒光聚光器。  

下面要為您介紹的是使用時(shí)可采用的方法：  

1、采用反射激發(fā)時(shí)，先在光路中加入綠色激發(fā)濾光片組，把照明可變孔徑光闌與視場(chǎng)光闌*打開(kāi)，調(diào)節(jié)光源位置，使照明光束通過(guò)物鏡轉(zhuǎn)換器的螺孔中央并使光源成象于物平面上，此時(shí)物鏡螺孔應(yīng)是通孔(不裝物鏡)。檢查激發(fā)光束是否通過(guò)物鏡螺孔中央，可在螺孔端面上放置半透明紙觀察光源光斑是否居中，在某些顯微鏡中，光源是在垂直面內(nèi)調(diào)節(jié)其上下左右位置，而光源成象是通過(guò)集光鏡沿軸方向移動(dòng)來(lái)達(dá)到的。  

2、采用透射激發(fā)時(shí)，可以使用蘭色光線根據(jù)普通明場(chǎng)照明法進(jìn)行照明系統(tǒng)的調(diào)節(jié)，這包括光源調(diào)節(jié)及聚光鏡中心的調(diào)節(jié)。如果采用暗場(chǎng)聚光鏡，則還需要注意暗場(chǎng)聚光鏡的使用及調(diào)節(jié)方法，當(dāng)用蘭色光線調(diào)節(jié)好后，就可采用更換濾色片的方法，使標(biāo)本得到所需要的激發(fā)光線照射標(biāo)本，但要注意使遏止濾光片已在光路中，這樣可以保護(hù)觀察者眼睛免受紫外線損傷。  

希望上述內(nèi)容能夠幫助大家更好的了解熒光顯微鏡。